背景：

       β1-4 Galactosidase是一类重要的糖基化研究的工具酶。Rhinogen^® β1-4 Galactosidase是将β1-4 Galactosidase 基因重组并表达于大肠杆菌BL21中的重组酶，能够催化寡糖或者糖蛋白非还原末端的β1-4连接的半乳糖残基的水解，如图1 所示。

图1 β1-4 Galactosidase的酶切位点

包装规格：

       Rhinogen^® β1-4 Galactosidase包装规格如下：

储存体系：

       QPF-006储存在缓冲液中，以液体的形式提供。缓冲液的组成为：50 mM NaCl, 20 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA (pH 7.5, 25°C)。

配套试剂：

       Rhinogen^® β1-4 Galactosidase提供的配套试剂如下：

产品来源：

       Rhinogen^® β1-4 Galactosidase是一种将来β1-4 Galactosidase基因重组并表达于大肠杆菌BL21中的重组酶，分子量大小约为94KD。

产品质量：

       SDS-PAGE分析，纯度≥95%；没有检测到污染的糖苷外切酶、糖苷内切酶及蛋白酶的活性。

产品特性：

       最适反应pH为6.0。失活条件：65°C处理10 min。

酶活定义：

       1个酶活力单位定义：在37°C，pH5.5条件下，1分钟内催化水解1 μmol 邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷所需要的酶量。

       1U Rhinogen^® β1-4 Galactosidase =1 U Prozyme Glyko^® β(1-4)-Galactosidase。不同公司产品的酶活力单位换算，请参考活力单位转换表，如下：

应用：

1. 聚糖结构分析；

2. 治疗性重组蛋白的表征及质量控制；

3. 消除糖蛋白的异质性。

使用建议：

1. 取1µg糖蛋白或者100nM寡糖样品，加纯化水至反应体系为9μl；

2. 加入1µl 10×Glyco缓冲液1；

3. 加入1µl Rhinogen^® β1-4 Galactosidase，轻柔混匀；

4. 37°C 条件下反应1小时。 

操作说明：

1. 反应体系可以线性放大或缩小；

2. 对于不同的糖蛋白样品，需要进行适当优化或根据经验确定最优的操作方法。在10-25μl反应体系中，对于1μg糖蛋白建议初始酶量1-2μl反应1小时，如果没有完全消化，建议过夜处理；

3. pNP- βGal是有效的阳性对照底物。

4. 如果天然及脱半乳糖残基的糖蛋白分子大小在凝胶上的差异足以进行区分，则SDS-PAGE可以用来评估糖蛋白糖基化程度及去糖基化程度；

5. 如果要对β1-4 Galactosidase切割后的聚糖进行分离回收，糖蛋白的底物浓度应约为10-20μM，适当延长反应时间；

6. 本产品仅供研究使用，不适用于人或动物的诊断及治疗用途。