背景：

       蛋白内切酶Glu-C(又称V8蛋白酶、谷氨酰胺内切酶、天冬酰胺内切酶、金黄色葡萄菌V8蛋白酶)属于丝氨酸蛋白酶家族，能特异水解谷氨酸(Glu)或天冬氨酸(Asp)残基羧基端肽键。其特异性受缓冲液组分直接影响，在pH7.8的NH4HCO3和pH4.0的CH3COONH4缓冲液中识别并切割Glu羧基端肽键，在pH7.8的磷酸盐缓冲液中识别并切割Glu或Asp羧基端肽键，且对Glu的水解速率高于Asp。

       Rhinogen^® Glu-C (Sequencing Grade)是利用重组大肠杆菌系统表达并经过多步层析纯化得到的重组蛋白酶，分子量大小约为24kD，可以单独使用或与其它蛋白酶搭配用于蛋白质酶切测序、肽图谱分析和肽指纹图谱分析。其在pH4.0-9.0之间均有活性，最适pH为8.0-8.5。V8蛋白酶的抑制剂有二异丙基氟磷酸（DFP）、α2-巨球蛋白和Nα-P-甲苯磺酰基-L-赖氨酸氯甲基酮（TLCK）。

包装规格：

       Rhinogen^® Trypsin (Sequencing Grade)包装规格如下：

       QIP-005是以冻干粉形式提供。

产品来源：

       Rhinogen^® Glu-C (Sequencing Grade)是利用重组大肠杆菌系统表达生产并经过多步层析纯化得到的重组蛋白酶，分子量大小约为24kDa。

产品质量：

       SDS-PAGE分析，纯度≥95%；没有检测到污染的蛋白酶活性。

产品特性：

       在pH4.0-9.0之间均有活性，最适pH为8.0-8.5。

储存条件：

       1.采用冰袋运输，收到产品后请立即将酶置于-20℃，密封防潮。

       2.使用水或50mM pH8.0Tris-HCl溶解成0.5mg/ml后，存于-20℃以下，6个月稳定；存于2-8℃（无菌），2个月稳定；25℃或37℃条件下12h，活性可维持85%以上；避免室温下长时间放置，建议分装储存，避免多次反复冻融。

产品特点：

       Rhinogen^® Glu-C (Sequencing Grade)是一种高度纯化和非常稳定的重组蛋白酶，具有稳定性高、比活性高等特点。适用于蛋白质组学研究中肽谱图、肽指纹谱或蛋白序列分析。

       1. 高纯度：没有污染蛋白酶，纯度≥95％；

       2. 高稳定性：每批产品都经过严格的质量控制，以实现产品批间稳定性；

       3. 无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，生产过程不使用任任何动物源原料。

应用：

       1. 肽谱图、肽指纹谱或蛋白序列分析；

       2. 蛋白质组学研究。

使用建议：

       1、试剂准备：

       1）使用水或50mM pH8.0 Tris-HCl溶解干粉，得到浓度为0.5mg/ml-1mg/ml的Glu-C溶液。溶解后建议根据单次使用量进行分装，最大限度避免污染或自切。

       2、推荐使用方法：

       1） 目的蛋白溶解：用酶切缓冲液（如采用25-50mM pH7.8 NH₄HCO₃缓冲液）溶解目的蛋白，若目的蛋白溶解度低，可以考虑对目的蛋白进行变性处理（如添加尿素、SDS、DTT或加热）。尿素和SDS对Glu-C蛋白酶的影响见下表：

       2）目的蛋白酶切：Glu-C蛋白酶的使用量推荐为，Glu-C蛋白酶：目的蛋白=1:20-1:100(w/w) ，最适pH为8.0-8.5，25℃或37℃酶切2-18hr。

       注意：对于不同的蛋白样品，需要实验摸索最适的酶浓度及反应时间。

操作说明：

       本产品仅供研究使用，不适用于人或动物的诊断及治疗用途。