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NuclecutTM 全能核酸酶
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RA-NC01-A
10KU
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产品概述

背景:  

      在生物制品的制备/生产过程中,去除DNA残留是极为重要的。在过去几年里,重组蛋白类生物药物的发展突飞猛进,并且在未来依然前景广阔。在微生物系统中,这些重组蛋白一般都是通过微生物的发酵,并且通过裂解微生物细胞而释放出来。然而,在释放出目标产物的同时,细胞裂解物会同时产生一些杂产物,比如宿主细胞蛋白、核酸(DNA以及RNA)、细胞内毒素以及一些其他宿主细胞杂质。重组蛋白药物中的DNA残留可能会给患者体内带入激活的致癌基因,或者作为潜在的感染病毒DNA致使患者被感染。因此,DNA残留量是重组蛋白药物的一个重要的评价标准。世界上许多权威机构都对重组蛋白类药物中的宿主DNA残留量做出了严格的规定,对于每支疫苗中的DNA残留量,WHO规定不可以超过l0ng,美国FDA规定不可以超过l0pg,我国规定为l00pg以下。 

      NuclecutTM 全能核酸酶(SuperNuclease),是一种核酸内切酶,可将核酸降解成2~5个碱基的5'-单磷酸核苷酸,因其能高效降解任何形式(双链,单链,线状,环状)的DNA和RNA而没有蛋白裂解活性,因此被称为“全能核酸酶”。全能核酸酶能有效降低蛋白样品粘度,去除蛋白样品中核酸的污染,且无蛋白酶活性残留,NuclecutTM 全能核酸酶活性达1×106U/mg蛋白。全能核酸酶在降低粘性的同时,也具有多种其他用途,如:减少了样品处理时间、增加了蛋白产量、离心时沉淀和上清分离的更彻底、更便于溶液的离心(尤其是超滤)、提高色谱纯化的效率等。

概述:

      该酶在0~42℃的均有活性,最适温度为37℃;有效的pH范围为6.0-10.0,最适pH为8.0;发挥活性需要Mg2+存在,1-2mM为最佳;在去污剂、SDS、尿素等存在下仍然保持一定活性。全能核酸酶可以非特异性裂解单链以及双链的DNA和RNA,并切割出一个3'-OH和5'-磷酸基。

产品包装:

     NuclecutTM 全能核酸酶(SuperNuclease)包装规格如下:

目录号 规格
RA-NC01-A
10KU
RA-NC01-B
50KU
RA-NC01-C
500KU

      产品储存于20mM Tris-HCI,pH8.0,2mM MgCl2,20mM NaCl和50%(v/v)甘油中,不添加防腐剂。

产品来源

     NuclecutTM 全能核酸酶序列来源于Serratia marcescens,重组表达于E. coli,单体理论分子量约27.5KD,C端带6×His标签。

产品特性

     NuclecutTM 全能核酸酶可非特异性降解所有形式的DNA和RNA(单链的、双链的、线性的和环化的),将核酸完全消化为长度为3至5个碱基的5'-单磷酸末端寡核苷酸。

产品质量

      ·  高活性:≥1×106U/mg 蛋白、≥250U/μl;

      ·  高纯度:通过SDS-PAGE检测,纯度≥90%;

      ·  高稳定性:每批产品都经过严格的质量控制,以实现产品批间稳定性。

      ·  无蛋白酶活性:偶氮酪蛋白法分析无蛋白酶活性。

      

储存条件:

      采用干冰运输,收到产品后请立即将其置于-20℃保存。复溶后可适当分装以减少多次冻融带来的活性损失。

应用:

      ·  从蛋白质和其他生物制剂中去除DNA / RNA;

      ·  降低由核酸引起的粘度;

      ·  在二维凝胶电泳和色谱中制备样品;

      ·  防止细胞结块;

      ·  降低哺乳动物细胞提取物的粘度;

      ·  降低大肠杆菌细胞裂解液的粘度以增强过滤性。

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常见问题

什么样的质量/数量的酶对特定的应用是足够的? 
有几个参数如温度及酶切体系会影响酶的活性,因此最佳条件将因工艺而异,需要通过实验来确定。

实验过程中,需要在哪一步加入全能核酸酶?如果在低温下进行酶切,需要添加多少全能核酸酶?
这取决于使用全能核酸酶的目的,但一般情况下,酶的添加最好是在培养后和捕获步骤之前。
在温度低于37℃时,酶的效率降低,补偿这种效率下降所需的量因过程而异,并取决于现有的其他参数。通常,增加另一个参数,如孵育时间,可以在不需要增加酶用量的情况下进行补偿。

为什么全能核酸酶作用后没效果?什么会抑制其活性?
全能核酸酶活性范围较广,而1-2mM Mg2+的浓度对全能核酸酶的活性至关重要。
Mn2+可以替代Mg2+;在Mg2+的存在下,酶活性达到最佳。一价阳离子浓度>300mM,磷酸盐浓度>100mM,以及硫酸铵浓度>100 mM都会抑制约50%的活性。此外,>1mM EDTA浓度也会抑制全能核酸酶的活性。

酶活降低的原因是什么?
全能核酸酶通常非常稳定,然而在极少数情况下,会导致活性丧失。可能原因有:
1)不可逆失活可能是由于样品中存在变性剂,如蛋白酶;或者是存储不当。
2)可逆失活通常是由于螯合剂的存在,如EDTA,它可以螯合去除活性必需的镁离子。
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