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O-Glycoprotease
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QIP-008-A
2000U
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产品概述

      O-糖蛋白酶(O-Glycoprotease)序列来自Akkermansia muciniphila,重组表达于E.coli,C端带6×His标签。O-糖蛋白酶是一种O-糖蛋白特异性内切蛋白酶,可催化天然黏蛋白型O-糖基化蛋白中与O-聚体直接相邻的肽键的水解。

      O-糖蛋白酶作为内切蛋白酶,高度特异性地在丝氨酸或苏氨酸的O-聚糖N端消化蛋白质。这就产生了N端携带O-糖链的糖肽,并使O-糖链分析、O-糖链定位和O-聚糖位点测定成为可能。

      O-糖蛋白酶对唾液酸化的核心1 O-聚糖活性最高,对核心3 O-糖基化和α 2,3唾液酸化核心1的糖蛋白活性较差,与Tn抗原、核心2和α2,6唾液酸化核心1的O-聚糖位点无活性。仅仅只有N-聚糖修饰时,此酶不酶切。该酶对带有或不带有唾液酸的O-聚糖蛋白均有活性,在去唾液酸的O-聚糖蛋白上活性更高。此酶在pH 5.5-7.5之间均能保持较高活性,能耐1M NaCl,但对EDTA高度敏感(0.5mM EDTA),并且被Zn2+部分抑制。

产品包装

Rhinogen®O-糖蛋白酶(O-Glycoprotease)包装规格如下:

目录号
规格
制剂
QIP-008
2000U
冻干于20mM TBS,pH7.6中,不添加防腐剂

配套试剂:

配套提供的Rhinogen® α2-3,6,8,9 Neuraminidase(EDTA-free)包装规格如下:

目录号
规格
制剂
QPF-012
0.6U/30μl
50mM NaCl,20mM Tris-HCl(pH7.5 at 25°C)

配套提供的试剂如下:

目录号
试剂
成分
EB10
10×Glyco缓冲液3
200mM Tris,pH6.8

产品来源:   

      Rhinogen® O-糖蛋白酶序列来源于Akkermansia muciniphila,重组表达于E. coli,理论分子量约42KD,C端带6×His标签。

产品质量:

      ·  高稳定性:每批产品都经过严格的质量控制,以实现产品批间稳定性;

      ·  高纯度:通过SDS-PAGE检测,O-糖蛋白酶纯度≥90%,α2-3,6,8,9 Neuraminidase纯度≥95%。

       

产品特性:

      O-糖蛋白酶(O-Glycoprotease)是一种O-糖蛋白特异性内切蛋白酶,可催化天然黏蛋白型O-糖基化蛋白中与O-聚体直接相邻的肽键的水解,位点在O-糖基化丝氨酸和苏氨酸残基的N端。 

酶活定义:

     与α2-3,6,8,9Neuraminidase(EDTA-free)搭配使用,在20mM Tris-HCl,pH6.8条件下,37℃孵育2小时,1单位酶(1U)可消化1μg糖蛋白(TNFR)的≥90%,通过SDS-PAGE确认。 

储存条件:     

      采用冰袋运输,长期储存请置于-20℃,重悬后2-8℃可保存1个月。避免反复多次冻融。 

应用:

      ·  O-糖基化分析;

      ·  O-聚糖谱;

      ·  O-聚糖位点测定

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常见问题

已知的O-糖蛋白酶抑制剂有哪些?
O-糖蛋白酶是一种金属蛋白酶,因此对螯合剂(如EDTA)高度敏感,浓度>5mM会导致酶的完全抑制。ZnCl2也部分抑制O-糖蛋白酶活性。

O-糖蛋白酶是否可以和唾液酸酶合用?
是的,与唾液酸酶结合使用,可用于去唾液酸化和消化O-糖基化蛋白质,提高O-糖蛋白酶酶切效率。

必须要去除唾液酸吗?
在唾液酸存在下,O-糖蛋白酶的活性显着降低,因此我们建议使用唾液酸酶去除唾液酸。或对您的样品尝试使用和不使用唾液酸酶条件下对比消化,以评估您的特定样品是否有必要去除唾液酸。

是否需要样品处于天然折叠状态?还是要进行变性处理?
如果消化不充分,可能是由于样品的O-聚糖存在空间位阻,酶无法到达导致的。在这种情况下,我们建议尝试以下工作流程:还原、变性、羧甲基化、置换缓冲液,然后使用O-糖蛋白酶和唾液酸酶进行消化。

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