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NuclecutTM GMP级全能核酸酶
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GMP-RA-NC01-A
10KU
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GMP-RA-NC01-B
50KU
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GMP-RA-NC01-C
500KU
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产品概述

背景:  

      在生物制品的制备/生产过程中,去除DNA残留是极为重要的。在过去几年里,重组蛋白类生物药物的发展突飞猛进,并且在未来依然前景广阔。在微生物系统中,这些重组蛋白一般都是通过微生物的发酵,并且通过裂解微生物细胞而释放出来。然而,在释放出目标产物的同时,细胞裂解物会同时产生一些杂产物,比如宿主细胞蛋白、核酸(DNA以及RNA)、细胞内毒素以及一些其他宿主细胞杂质。重组蛋白药物、病毒疫苗等生物制品中的DNA残留可能会给患者体内带入激活的致癌基因,或者作为潜在的感染病毒DNA致使患者被感染。因此,DNA残留量是重组蛋白药物的一个重要的评价标准。世界上许多权威机构都对重组蛋白类药物中的宿主DNA残留量做出了严格的规定,对于每支疫苗中的DNA残留量,WHO规定不可以超过l0ng,美国FDA规定不可以超过10pg,我国规定100pg以下。

概述:

      NuclecutTM全能核酸酶(SuperNuclease)是一种核酸内切酶,可将核酸降解成2~5个碱基的5'-单磷酸核苷酸,因其能高效降解任何形式(双链,单链,线状,环状)的DNARNA而没有蛋白裂解活性,因此被称为全能核酸酶。全能核酸酶可以非特异性裂解单链以及双链的DNARNA,并切割出一个3'-OH5'-磷酸基(如图1),主要用于重组蛋白、病毒疫苗、细胞和基因治疗用病毒载体、溶瘤病毒及其它生物制品中DNA/RNA去除。该酶在0~42℃的均有活性,最适温度为37℃。有效的pH范围为6.0-10.0,最适pH8.0。发挥活性需要Mg2+存在,1-2mM为最佳。在去污剂、SDS、尿素等存在下仍然保持一定活性。



1. 全能核酸酶的作用位点

产品包装:

     NuclecutTM GMP级全能核酸酶(SuperNuclease-GMP)包装规格如下:

目录号
规格

GMP-RA-NC01-A

10KU
GMP-RA-NC01-B

50KU

GMP-RA-NC01-C

500KU


      产品储存于20mM Tris-HCIpH8.02mM MgCl220mMNaCl50%v/v)甘油中,不添加防腐剂。

产品来源:

     NuclecutTM GMP全能核酸酶序列来源于Serratiamarcescens,重组表达于E. coli,单体理论分子量约27.5KDC端带6×His标签。

产品特性:

     全能核酸酶可非特异性降解所有形式的DNARNA(单链的、双链的、线性的和环化的),将核酸完全消化为长度为35个碱基的5'-单磷酸末端寡核苷酸。

     NuclecutTM GMP级全能核酸酶采用非动物源性原料, 不添加抗生素,符合GMP生产标准,满足法规要求。适用于重组蛋白、病毒疫苗、细胞和基因治疗用病毒载体、溶瘤病毒及其它生物制品中DNA/RNA去除。

产品质量:

      ·  高活性:≥1.1×106U/mg 蛋白、≥250U/μl
      ·  高纯度:通过SDS-PAGE检测,纯度≥95%;通过 SEC-HPLC分析确定,纯度 ≥99 %
      ·  高稳定性:每批产品都经过严格的质量控制,以实现产品批间稳定性;
      ·  无蛋白酶活性:偶氮酪蛋白法分析无蛋白酶活性;
      ·  内毒素:由重组C因子法确定每1000 U核酸酶内毒素含量< 0.01 EU
      ·  微生物检测:< 10 CFU/1×106U

储存条件:

      采用干冰运输,收到产品后请立即将其置于-20℃保存。

应用:

      ·  可从重组蛋白及其它生物制品中去除DNA/RNA
      ·  适用于病毒疫苗、细胞和基因治疗用病毒载体及溶瘤病毒的纯化
      ·  降低由核酸引起的粘度
      ·  在二维凝胶电泳和色谱中制备样品
      ·  防止细胞结块,尤其是冷冻细胞
      ·  降低哺乳动物细胞提取物的粘度
      ·  降低大肠杆菌细胞裂解液的粘度以增强过滤性
      ·  从包涵体中纯化蛋白

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常见问题

若需要其它包装规格,是否可以接受定制?
可以。若需GMP条件下生产的药用级大包装,请咨询客服电话0512-87663137,或发送电子邮件至techserv@rhinobio.com。

什么样的质量/数量的酶对特定的应用是足够的?
有几个参数如温度及酶切体系会影响酶的活性,因此最佳条件将因工艺而异,需要通过实验来确定。

实验过程中,我需要在哪一步加入全能核酸酶?如果在低温下工作,需要添加多少全能核酸酶?
这取决于使用全能核酸酶的目的,但一般情况下,酶的添加最好是在培养后和捕获步骤之前。
在温度低于37℃时,酶的效率降低,补偿这种效率下降所需的量因过程而异,并取决于现有的其他参数。通常,增加另一个参数,如孵育时间,可以在不需要增加酶用量的情况下进行补偿。

为什么全能核酸酶作用后没效果?什么会抑制其活性?
全能核酸酶活性范围较广,而1-2mM Mg2+的浓度对全能核酸酶的活性至关重要。
Mn2+可以替代Mg2+;在Mg2+的存在下,酶活性达到最佳。一价阳离子浓度>300mM,磷酸盐浓度>100mM,以及硫酸铵浓度>100mM都会抑制约50%的活性。此外,>1mM EDTA浓度也会抑制全能核酸酶的活性。

酶活降低是为什么?
全能核酸酶通常非常稳定,然而在极少数情况下,会导致活性丧失。可能原因有:
1)不可逆失活可能是由于样品中存在变性剂或蛋白酶,或是存储不当。
2)可逆失活通常是由于螯合剂的存在,如EDTA,它可以螯合去除活性必需的镁离子。

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