细胞活性是判断体外培养细胞在某种条件下是否可以正常生长的指标，例如药物处理、放射性或紫外线照射、培养条件变化等。细胞活性检测方法有很多种，如台盼蓝染色法、克隆（集落）形成法、比色法（MTT法）、荧光染色法、ATP含量测定法等。

染色计数法是细胞培养中检测细胞死活最常用的方法，直接利用死细胞和活细胞对染料的不同亲和力，检查细胞活性，能在光学显微镜下观察到染色结果。可分为两类：死细胞着色法和活细胞着色法。使死细胞着色的常用染料有台盼蓝、苯胺黑、伊红Y。能使活细胞着色的常用染料有结晶紫、亚甲基蓝、甲苯胺蓝等。其中最常用的是台盼蓝染色法。细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA结合，使其着色，而活细胞能阻止染料进入细胞内，故可以鉴别死细胞和活细胞。通过细胞计数可得到细胞的存活率。

MTT比色分析法原理是活细胞内的线粒体中的琥珀酸脱氢酶可以将MTT[化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐，外观淡黄色] 还原成蓝紫色结晶物质，并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的蓝紫色结晶，溶液颜色的深浅与所含的结晶物质量成正比。用酶标仪在570nm波长下测定OD值。MTT方法目前大多用于检测培养细胞的生长和增殖、新药筛选、细胞毒性试验、肿瘤细胞敏感性试验等。但是MTT法不太适合于悬浮细胞，因为在溶解甲臜之前，需将培养液吸出，这一步很容易造成甲臜流失，因而导致实验结果偏差。若不去除培养基，培养基中的血清和酚红会影响实验结果。

为了消除培养液中血清和酚红的影响，有人进一步提出改良的MTT法。针对由于MTT的产物甲臜不溶于水的缺点，研究人员又开发了很多种水溶性的四氮唑盐类：如XTT、CCK-8等。

XTT和CCK-8都是新合成的四唑氮衍生物，与MTT属于同类物质，它们都能被活细胞中线粒体内的脱氢酶降解而产生棕黄色水溶性的甲臜，能直接通过光谱吸收测定OD值，进而推测细胞的增殖情况。

LDH是活细胞浆内酶，当细胞损伤，细胞膜通透性变化时，会将LDH释放到培养液中。因此培养液中该酶的活性与被裂解的细胞数量成正比。由LDH催化的酶促反应在催化乳酸生成丙酮酸的过程中使氧化型辅酶I(NAD+)变成还原型辅酶I(NADH)，后者再通过递氢体一吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化四氯唑(INT)，INT接受氢离子被还原成紫红色的化合物，酶标仪检测其OD值。与结晶紫染色法和MTT比色法进行灵敏度、重复性和相关性比较，该法简便，灵敏度高，敏感性、客观性、试剂成本及测定速度等都要优于结晶紫染色法和MTT比色法。LDH法常用于NK细胞、CTL细胞活性检测，从而评价机体免疫功能。

采用化学发光方法检测ATP，具有更高的敏感性，并具有简便、快速等特点，因此是目前更为流行的方法。利用化学发光法检测ATP的原理为：活细胞在氧气和ATP同时存在时，荧光素酶催化荧光素发生氧化反应，消耗ATP，荧光素酶发出荧光 (波长为562 nm)，而死细胞因为ATP的水解不能提供催化反应所需的能量导致不能产生荧光。该方法具有较高的发光效率，且荧光强度与ATP的含量有很好的相关性，故可以通过荧光强度反映出存活细胞的数量。

细胞活性直接反映出细胞维持或恢复自身代谢、增殖等生理活动的能力，通过检测细胞活性可知晓细胞状态、分析细胞毒性、比较增殖能力或进行活细胞计数等，不同的指标都可以反映细胞活性，可根据实验条件、检测细胞、以及评价方式的不同，综合不同检测方法的优缺点选择适合的检测方法。

参考文献